新闻中心
Science:张峰建立CRISPR/Cas9人细胞敲除体系
来源: | 作者:pmodc9b5a | 发布时间: 2017-12-29 | 2823 次浏览 | 分享到:

日前,来自麻省理工学院,哈佛医学院等机构的研究人员完成了人类细胞全基因组范围内 CRISPR/Cas9 敲除筛选,这对于 CRISPR/Cas9 技术的发展具有重要意义。相关研究论文刊登在了近期出版的《科学》杂志上。文章的通讯作者是麻省理工学院脑与认知科学助理教授、McGovern 脑研究所和Broad研究所核心成员张峰(Feng Zhang,音译)。张峰日前与其他 4 位 CRISPR 技术开创者共同建立了爱迪塔斯医药公司(Editas Medicine),该公司打算利用 CRISPR 基因编辑技术治疗疾病。


CRISPR/Cas9 技术成为了最近的新宠儿,这种基因组编辑技术更易于操作,也具有更强的扩展性。此前张峰研究组曾利用细菌 RNA,引导 Cas9 核酸酶在小鼠和人类基因组的特定基因位点上进行切割,完成了精确的目标链断裂。他表示,“CRISPR 系统即使在从细菌细胞中取出酶和 RNA,然后再插入到哺乳动物细胞中之后,依然能如此有效的工作,这令人惊讶。”

在此基础上,研究人员发现靶向 18080 个基因(64751 个独特靶向序列)的全基因组范围 CRISPR/Cas9 敲除(GeCKO)文库慢病毒传递,能进行在人类细胞中的正向和负向选择性筛选。研究人员先利用 GeCKO 文库鉴定了对癌症和多能干细胞细胞活力必不可少的基因,其次他们还在一个黑素瘤模型中,筛选出了涉及药物维罗非尼(Vemurafenib)耐药性的基因。

从中研究人员筛选出了多个有效的基因,比如之前曾发现的 NF1 和 MED12,以及未曾发现过的NF2,CUL3,TADA2B 和 TADA1 。研究人员指出靶向同一基因的独立导向RNAs之间存在高度的一致性和高命中确认率,这对于Cas9基因组范围内筛选具有重要意义。

目前靶向基因组编辑技术已广泛用于基础研究和临床应用。CRISPR/Cas9 系统中的 Cas9 核酸酶能通过 20nt 导向序列靶向特异性基因组位点,允许某些与 DNA 靶标的错配,从而促进一些意外脱靶突变的形成。张峰研究组此前还揭示了一种增加基因组编辑特异性的新方法,即利用 RNA 导向的 CRISPR/Cas9 系统形成双切口,在未影响靶向切割效率的前提下,方便小鼠受精卵基因敲除研究。

 


电话:  020-89898390

传真:  020-89898391

电子邮件:info@sinovagen.com

地址: 广州市海珠区南洲路44号盛恒商务中心619室

联系我们